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亮氨酸氨基肽酶(LAP)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1315 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876507S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876507S
用途范围 LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)
试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
LAP 是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶,广泛存在于肝、肾、胰等组织中,尤其以肝脏中含量最为丰富。各类肝 病 患者因肝细胞损伤,血清 LAP 的活性均有不同程度的升高,因此,血清 LAP 活性的检测能从不同侧面反映各种肝 病的发生和发展。

测定原理:

LAP 分解 L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在 405nm 有 吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 LAP 活性。

自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

样本的前处理:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

LAP 测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂二转移至试剂一中充分溶解(如较难溶解,可 50℃水浴加热约 30min 促进溶解);在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 50μL 样本和 150μL 试剂一,混匀后立即记录 405nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。

注意事项:若 ΔA 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。
LAP 活力单位的计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)LAP 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟生成 1 nmol 的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=205.8×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 LAP 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=0.103×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)LAP 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟生成 1 nmol 的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=411.5×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 LAP 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷ (V 样×Cpr) ÷T=411.5×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=411.5×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=0.206×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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