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羟脯氨酸(HYP)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
462 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876516S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876516S
用途范围 样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光 值,可计算HYP含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨等,因此 HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

测定原理:

样品经酸水解产生游离的 HYP,进一步被氯胺 T 氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在 560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液 560nm 吸光值,可计算 HYP 含量。
自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、无水乙醇、异丙醇、6mol/L盐酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
组织提取液:6mol/L 盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存。
细胞提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
羟脯氨酸提取:
1. 组织:称取约 0.5g 样品于玻璃管,加入 5mL 的组织提取液,置于 110℃烘箱,水解 6 至 12 小时,用提取液定容至 5mL,12000g,25℃,离心 20min,取上清待测。
2. 细胞:取 500 万个细胞,加入 2mL 的细胞提取液,于高压消毒器中 15 磅保持 30min,自然降压后待测。
3. 血清游离羟脯氨酸提取:取 0.2mL 血清,加入 1mL 无水乙醇使蛋白质沉淀,8000g4℃离心 5min。将上清倒入另一个 EP 管,氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入 0.4mL50%异丙醇,充分溶解混匀待测。

测定操作表:

2022111409545722544

羟脯氨酸含量计算公式:
标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按组织计算
HYP 含量(mg/g 鲜重)=(ΔA -0.0251)÷ 64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 0.385×(ΔA -0.0251)÷W
(2)按细胞计算
HYP 含量(mg/104 cell)=(ΔA -0.0251)÷ 64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 0.154×(ΔA -0.0251)÷细胞数量(万个)
(3)按液体体积计算
HYP 含量(mg/mL)=(ΔA -0.0251)÷ 64.875×V 反总÷V 样×2 = 0.154×(ΔA -0.0251)
V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应中样品体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积, mL; W:样品质量,g;2,血清吹干后复溶的倍数。
注意事项:
1、 OD 值大于 0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。
3、 检出限为 3.8mg/L。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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