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羟脯氨酸(HYP)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
567 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876517S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876517S
用途范围 样品经水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨等,因此 HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

测定原理:

样品经水解产生游离的 HYP,进一步被氯胺 T 氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在 560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液 560nm 吸光值,可计算 HYP 含量。
自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、无水乙醇、异丙醇、6mol/L 盐酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
组织提取液:6mol/L 盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存。
细胞提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。
羟脯氨酸提取:
1. 组织:称取约 0.2g 样品于玻璃管,加入 2mL 的组织提取液,置于 110℃烘箱,水解 6 至 12 小时,用提取液定容至 2mL,12000g,25℃,离心 20min,取上清待测。
2. 细胞:取约 500 万个细胞,加入 1mL 的细胞提取液,于高压消毒器中 15 磅保持 30min,自然降压后待测。
3. 血清游离羟脯氨酸提取:取 0.1mL 血清,加入 0.5mL 无水乙醇使蛋白质沉淀,8000g4℃离心 5min。将上清倒入另一个 EP 管,氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入 0.2mL50%异丙醇,充分溶解混匀待测。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 560nm,蒸馏水调零。
2、 操作表

2022111409510070326

2022111409511112718

羟脯氨酸含量计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按样品重量计算
组织羟脯氨酸含量(mg/g 鲜重)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) = 0.154×(ΔA-0.0251)÷W
(2)按细菌或细胞密度计算
细胞羟脯氨酸含量(mg/104 cell)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 0.077×(ΔA-0.0251)÷ 细胞数量(万个)
(3)按血清体积计算
HYP 含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷ 64.875×V 反总÷V 样×2 =0.154×(ΔA-0.0251)
V 反总:反应总体积,0.3 mL;V 样:反应中样品体积,0.06mL;V 样总:加入提取液体积, mL;W:样本重量,g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=32.4375x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按样品重量计算
HYP 含量(mg/g 鲜重)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 0.308×(ΔA-0.0251)÷W
(2)按细菌或细胞密度计算
HYP 含量(mg/104 cell)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 0.154×(ΔA-0.0251)÷细胞数量(万个)
(3)按血清体积计算
HYP 含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V 反总÷V 样×2 = 0.308×(ΔA-0.0251)
V 反总:反应总体积,0.3 mL;V 样:反应中样品体积,0.06mL;V 样总:加入提取液体积, mL;W:样本重量,g;2,血清吹干后复溶的倍数。
注意事项:
1、 吸光值大于 0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。
3、 检出限为 3.8mg/L。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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