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谷氨酸(Glu)含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
508 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876520S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876520S
用途范围 利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在570nm下进行测定。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量测定试剂盒

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu 还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理:

利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在 570nm 下进行测定。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解混匀,用不完的试剂仍 4℃ 保存。
谷氨酸提取:
1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 常温离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~10的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)或者细胞培养液加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 570nm,蒸馏水调零。
2、 在有盖 EP 管中加入下列试剂:

2022111409444436945

混匀,90℃水浴 20min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,于 570nm 波长处记录吸光值 A。△A=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。
谷氨酸含量计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0074x- 0.5255;x 为谷氨酸含量(μg/mL),y 为吸光值。
2、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2)=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr 4、按照样本质量计算
谷氨酸含量(μg/g 鲜重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(△A+0.5255) ÷W 5、按照细菌或细胞密度计算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0037x- 0.5255; x 为谷氨酸含量(μg/mL),y 为吸光值。
2、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2)=2703×(△A+0.5255)
3、按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(△A+0.5255) ÷Cpr 4、按照样本质量计算
谷氨酸含量(μg/g 鲜重)= [(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(△A+0.5255) ÷W 5、按照细菌或细胞密度计算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(△A+0.5255)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意:
1、该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定,检测下限为 100μg/mL。
2、标准曲线线性范围为:100μg/mL -600μg/mL。
3、 A 线性范围为:0.01-1;若大于 1 则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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