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半胱氨酸(Cys)含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
368 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876521S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876521S
用途范围 半胱氨酸与磷钨酸反应,可将磷钨酸还原成钨蓝,在600nm处有吸收峰,通过测定钨蓝的生成量,即可计算出半胱氨酸含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

半胱氨酸(cysteine, Cys)含量测定试剂盒
说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中,Cys 是 一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解 毒、改 善炎 症和过 敏 性皮 肤等 作 用。


测定原理:

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、85%磷酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前 1 天,向试剂三中加 5 mL 蒸馏水充分溶解,再加 85%磷酸 1.25mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 20 mL 蒸馏水,4℃可保存 2 周。
标准品:粉剂×1 瓶,临用前加 10 mL 蒸馏水,充分溶解。1μmol/mL 标准液,4℃避光保存。用不完的试剂4℃可保存 3 天。
半胱氨酸提取:
1、 液体样品中半胱氨酸提取:取 0.1mL 液体样品,加试剂一 0.9mL,充分混匀,8000g4℃离心 10min,取上清液,待测。
2、 组织中半胱氨酸提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10 min,取上清液待测。
3、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 600 nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100 μL 蒸馏水,500μL 试剂二,500μL 试剂三,混匀后室温静置 15min,于 600nm 处测定吸光值,记为 A 空白管。

3. 标准管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100 μL 标准液,500μL 试剂二,500μL 试剂三,混匀后室温静置 15min,于 600nm 处测定吸光值,记为 A 标准管。
4. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100 μL 上清液,500μL 试剂二,500μL 试剂三,混匀后室温静置 15min,于 600nm 处测定吸光值,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需要做一次。
计算公式:
1. 按液体样品的体积计算:
半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
2. 按样本质量计算:
半胱氨酸含量(μmol/g 鲜重)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V样总÷V 样)÷W=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算:
半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]÷(V样×Cpr)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算:
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)] ×(V 样总÷V 样×细胞数量)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量
C 标准品:标准品浓度,1μmol/mL;V 标准品:反应体系中加入标准品体积,0.1 mL;V 样:反应体系中加入样品提取液体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL。W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
检出限为 100μmol/L。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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