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氨基酸(AA)含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
92 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876523S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876523S
用途范围 氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,其颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
肝脏、肾 脏是氨基酸代谢的主要器官,故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外,氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生 长 发 育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。


测定原理:

氨基酸的 α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在 570 nm 有特征吸收峰;通过测定 570 nm 吸光度,来计算氨基酸含量。
自备仪器及用品:
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶(棕色),4℃避光保存。临用前加入 2 mL 无水乙醇,盖紧后充分混匀,再加入 28mL蒸馏水混匀,避光保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水,充分溶解。
标准品:粉剂×1 瓶,临用前加 10 mL 蒸馏水,充分溶解。1μmol/mL 标准液,4℃避光保存。

样品中 AA 提取:
1. 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行室温匀浆,然后转移到 1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取 15 min;自来水冷却后,8000g,4℃离心 10min,上清液置冰上待测。
2. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3. 血清等液体:直接检测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 570 nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取 EP 管,加入 50μL 蒸馏水,500μL 试剂二,500μL 试剂三和 50μL 试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温 15 min,冷却后反复颠倒 EP 管数次,于 570nm 测定吸光值,记为 A空白管。显色后务必在 30min 内测完。
3. 标准管:取 EP 管,加入 50μL 标准品,500μL 试剂二,500μL 试剂三和 50μL 试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温 15 min,冷却后反复颠倒 EP 管数次,于 570nm 测定吸光值,记为 A
标准管。显色后务必在 30min 内测完。
4. 测定管:取 EP 管,加入 50μL 上清液,500μL 试剂二,500μL 试剂三和 50μL 试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温 15 min,冷却后反复颠倒 EP 管数次,于 570nm 测定吸光值,记为 A测定管。显色后务必在 30min 内测完。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。
氨基酸含量计算公式:
(1)按照样本质量计算
氨基酸含量(μmol /g 鲜重)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)÷W=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
(2)按照样本蛋白浓度计算
氨基酸含量(μmol /mg prot)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]÷(V 样×Cpr)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
(3)按照细胞数量计算
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)] ×(V 样总÷V 样×细胞数量)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量
(4)按照液体体积计算
氨基酸含量(μmol /mL)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]÷V 样=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准品:标准品浓度,1 μ mol/mL;V 标准品:反应体系中加入标准品体积,0.05 mL;W:样品质量,
g;V 样:反应体系中加入样品提取液体积,0.05 mL;V 样总:样品提取液总体积,1mL,Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
1. 试剂盒中试剂三、试剂四和标准品均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的 4℃保存且 3 天内使用完毕。
2. 为保证实验结果的准确性,需先取 1-2 个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于 2.5),用蒸馏水稀释后再测定。
3. 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在 570nm 处无吸收峰,因此,570nm 处测定结果不含这两种氨基酸的量。
4. 检出限为 100μmol/L。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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