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谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
487 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876529S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876529S
用途范围 GS在ATP和Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与铁形成红色的络合物;该络合物在540nm处有最大吸收峰,可用分光光度计测定。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。


测定原理:

GS 在 ATP 和 Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为 γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与铁形成的络合物在 540nm 处有 吸收峰,可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:10mL×1 瓶,-20℃保存;临用前 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂二:10mL×1 瓶,-20℃保存;临用前 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 蒸馏水充分溶解待用。
试剂四:15mL×1 瓶,4℃保存。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 在 EP 管中加入下列试剂:

2022111409204792259

GS 活力单位的计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.8348x + 0.0008,R2 = 0.9999
1、血清(浆)GS 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式:
GS(μmol/h/mL)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷V 样÷T=10.268×ΔA
2、组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h/mg prot)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=10.268×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h/g 鲜重)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T=10.268×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h//104 cell)=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.021×ΔAV 反总:反应体系总体积,0.3mL; V 样:加入样本体积,0.07mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.4174x + 0.0008,R2 = 0.9999
1、血清(浆)GS 活性
单位定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式:
GS(μmol/h/mL)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷V 样÷T=20.535×ΔA
2、组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h/mg prot)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=20.535×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h/g 鲜重)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T=20.535×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS(μmol/h/104 cell)=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.041×ΔAV 反总:反应体系总体积,0.3mL; V 样:加入样本体积,0.07mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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