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鸟氨酸转氨酶(OAT)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
452 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-892741S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892741S
用途范围 鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生NAD,通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

鸟氨酸转氨酶(nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT)/分光光度法试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。

测定原理:

鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和 NADH 作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生 NAD,通过检测 340nm 处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外可见分光光度计、1mL 石英比色皿。
试剂组成和配制
提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 70 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加 20mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂 4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加 20mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂 4℃保存。
试剂四:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加 10mL 试剂一充分溶解;现配现用。
酶液提取
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g离心 10min,取上清置冰上待测。
3. 液体:直接检测。
测定操作
1. 分光光度计预热 30min,调节波长至 340nm。
2. 将配好的试剂二、三、四 37℃预热 5min。(注意:粉剂试剂需要自行配制)
3. 取 1mL 石英比色皿,依次加入 300μL 试剂二,300μL 试剂三,300μL 试剂四,100μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处初始吸光值和 37℃反应 10min 的吸光值 A2,△A=A1-A2。
计算公式
(1)按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
δ-OAT(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=160.77×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。δ-OAT(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=160.77×ΔA÷W
(3)按照细胞数量计算
酶活单位定义:每 104个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。δ-OAT(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T=160.77×ΔA÷细胞数量
(4)按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。δ-OAT(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T=160.77×ΔAV 反总:反应体系总体积,1mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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