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谷氨酸脱羧酶(GAD)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
338 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-892744S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892744S
用途范围 GAD 催化谷氨酸产生 GABA,利用 berthelot 反应测定 GABA 含量,从而测定 GAD 活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

谷氨酸脱羧酶((Glutamate decarboxylase,GAD)/分光光度法试剂盒

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
谷氨酸脱羧酶是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的限速酶,γ-氨基丁酸是中枢神 经 系 统中有效的抑制性神经递质,具有降 血 压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促 进 生 长 激 素 分 泌和保 肝利肾等作用,目前在医药和保健食品中已有广泛的应用。

测定原理:

GAD 催化谷氨酸产生 GABA,利用 berthelot 反应测定 GABA 含量,从而测定 GAD 活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:液体 20mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂六:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂七:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
样品测定的准备:
1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次);8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、在 EP 管中加入如下试剂
2022111408510476027

2、在新 EP 管中加入如下试剂

2022111408512212316

混匀,取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿,测定 640nm 下吸光值 A 测定与 A 对照,ΔA=A 测定-A 对照,每个测定管设一个对照管。
GAD 活力计算:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.1364x - 0.0432,R2 = 0.999;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。 GAD 活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T=0.366×(ΔA+0.0432) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。 GAD 活力(μmol/min/g鲜重)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=0.366×(ΔA+0.0432) ÷W
4、按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。 GAD 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(500 ×V 样÷V 样总)÷T=0.0007×(ΔA+0.0432)V 样:加入样本体积:0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 反总:反应体系总体积,0.3mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;T:反应时间,
60min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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