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脲酶(UE)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
682 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876473S
  • 发布日期: 2022-11-11
  • 更新日期: 2022-11-11
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876473S
用途范围 利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

脲酶(Urease, UE)测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
UE 能够水解尿素,产生氨和碳酸。UE 活性与有机物质含量、全氮和 氮含量呈正相关,反应了氮素状况。


测定原理:

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,临用前加入 9mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂 4℃保存;
试剂二:液体 22mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三 A 液:液体×1 支,4℃保存;试剂三 B 液:液体×1 瓶,4℃保存;临用前将 A 液倒入 B 液中混合,
待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;

样本的前处理:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 578nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应

2022111109423233060

2022111109424155527

UE 活力计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0915x +0.0373;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值 A。
1、血清(浆)UE 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/mL)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷V 样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
单位的定义:每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/ g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0546×ΔA10:稀释倍数;T:反应时间,60min; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量, g;500:细菌或细胞总数,500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.04575x +0.0373;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值 A。
1、血清(浆)UE 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/mL)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷V 样÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
单位的定义:每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
UE 活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.1092×ΔA10:稀释倍数;T:反应时间,60min; V 反总:反应体系总体积:0.3mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V 样总:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量, g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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