谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒说明书

测定意义：
GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

测定原理：

GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；

粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后 12h 内用完）；
（2）取 0.05mL 样本和 0.95mL 工作液于 1mL 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2。

GDH 活性计算：
1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=643×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T=1.286×ΔAV 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。