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Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
740 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-892727S
  • 发布日期: 2022-11-11
  • 更新日期: 2022-11-11
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892727S
用途范围 Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸,谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应,同时产生 NADH,使 WST-8 显橙黄色,在 450 nm 下测定吸光值。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

Fd-谷氨酸合成酶(Glutamate synthase,Fd-GOGAT)试剂盒

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GOGAT 广泛分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环,参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的 Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中,与光合作用和光呼吸有关,主要同化 NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。


测定原理:

Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸,谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应,同时产生 NADH,使 WST-8 显橙黄色,在 450 nm 下测定吸光值。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 6mL 试剂六溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;

试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 5mL 蒸馏水溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 50mL 试剂六溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;
试剂五:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂六:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
在 EP 管中加入如下试剂

2022111109012521811

3、 工作液配制
临用前按试剂四:试剂五= 900:100(μL)的比例配制工作液,用多少配多少。
4、 谷氨酸含量测定
在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

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Fd-GOGAT 活性计算:
标准曲线为 y = 4.4336x - 0.0005,R2 = 0.9996;其中 x 为标准品浓度 μmol/mL, y 为吸光值△A。
1)按样本蛋白浓度计算:


单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。Fd-GOGAT(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0005)÷ 4.4336×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T×1000=37.6×(ΔA+0.0005)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。Fd-GOGAT(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0005)÷ 4.4336×V 反总÷(W× V 样÷V 样总) ÷T×1000=37.6×(ΔA+0.0005)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.25mL;ε:V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1000,μmol 到 nmol 的换算系数。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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