Fd-谷氨酸合成酶(Glutamate synthase，Fd-GOGAT)试剂盒

测定意义：
GOGAT 广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的 Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中，与光合作用和光呼吸有关，主要同化 NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。

测定原理：

Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸，谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸的脱氢反应，同时产生 NADH，使 WST-8 显橙黄色，在 450 nm 下测定吸光值。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 12mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂五：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存；
试剂六：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm。
2、 样本测定在 EP 管中加入如下试剂

3、 工作液配制
临用前按试剂四：试剂五=180:20（μL）的比例配制工作液，用多少配多少。
4、 谷氨酸含量测定
在 96 孔板中加入如下试剂

混匀，25℃反应 30min，450nm 下测定吸光值 A 测定与对照，△A=A 测定-A 对照，每个测定管设一个对照管。
Fd-GOGAT 活性计算：
标准曲线为 y = 2.2168x - 0.0005，R2 = 0.9996；其中 x 为标准品浓度 μmol/mL, y 为吸光值△A。
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。

Fd-GOGAT（nmol/min/mg prot）=（ΔA+0.0005）÷ 2.2168×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T×1000=75.2×（ΔA+0.0005）÷Cpr 2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。

Fd-GOGAT（nmol/min/g 鲜重）=（ΔA+0.0005）÷ 2.2168×V 反总÷(W× V 样÷V 样总) ÷T×1000=75.2×（ΔA+0.0005）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.25mL；ε：V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000，μmol 到 nmol 的换算系数。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。