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抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
487 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876455S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876455S
用途范围 APX 催化 AsA 还原 H2O2,通过测定AsA的氧化量可计算得APX活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)活性测定试剂
盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化 H2O2 氧化 AsA,是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到 AsA 的含量,APX 与 AsA 具有一定的负相关性。


测定原理:

APX 催化催化 H2O2氧化 AsA,通过测定 AsA 氧化速率,来计算得 APX 活性。
自备仪器用品:
低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体 5mL×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
测定:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 290nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃中预热 30min。
3. 依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、700μL 预热的试剂一、100μL 试剂二和 100μL 试剂三,迅速混匀后在 290nm 测定 10 s 和 130 s 光吸收 A1 和 A2,△A=A1-A2。
APX 活性计算公式:
(1) 按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T=1786×△A÷ Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:每 g 组织每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX(nmol/min/g 鲜重 ) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1786×△A ÷W
ε:AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;109:1mol=1×109nmol;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W:样本质量,g;T:催化反应时间(min),2min。
注意事项:
配制好的试剂二 4℃保存,并且 3 天内使用完。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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