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抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
418 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876457S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876457S
用途范围 AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidase,AAO)活性测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
AAO 是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和 AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b 还原,该过程中电子的跨膜运输能够促 进 细 胞生长。


测定原理:

AAO 可直接氧化 AsA,通过测定 AsA 的氧化量,可计算得 AAO 活力。
实验中所需仪器及设备:
低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行
冰浴匀浆。16000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
AAO 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 265 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 依次在 1 mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、850μL 预热的试剂二和 50μL 试剂三,迅速混匀后在265nm 测定 10 s 和 130 s 光吸收 A1 和 A2,△A =A1-A2。
AAO 活性计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
AAO 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AAO 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
AAO(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d)×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 92.4×△A÷W
ε:AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;106:1mol=1×109nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:催化反应时间(min),2min。

注意事项:
配制好的试剂放在 4℃保存,三天内使用完。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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