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L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
2465 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876460S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876460S
用途范围 Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素C(Cyt c),还原型Cyt c在550nm有吸收峰;测定还原型Cyt c增加速率,来计算Gal LDH活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)活性测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
L-半乳糖途径是合成 AsA 的主要途径。Gal LDH 位于线粒体内膜,负责催化植物体内 AsA 生物合成的 一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内 AsA 含量的积累起着至关重要的作用。


测定原理:

Gal LDH 催化 L-半乳糖内酯还原细胞色素 C(Cyt c),还原型 Cyt c 在 550nm 有吸收峰;测定还原型 Cyt c 增加速率,来计算 Gal LDH 活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶(棕色),4℃保存。临用前加入 16mL 蒸馏水,充分溶解。
试剂三:粉剂×1 管,4℃保存。临用前加入 2mL 蒸馏水,充分溶解。
粗酶液提取:
照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
Gal LDH 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 550nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3.依次在、微量玻璃比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 预热的试剂二和 20μL 试剂三,迅速混匀后于 550nm 比色,记录 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2,△A = A2﹣A1。

Gal LDH 活性计算公式:
使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1nmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T=578×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原 1nmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T=578×△A ÷Wε:还原型 Cyt c 摩尔消光系数,17.3×103L/ mol/cm;d:96 孔板光径(cm),0.5cm;V 反总:反应体系总体积,0.2mL=0.0002 L;109:1mol=1×109nmol;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量 BCA 试剂盒;T:反应时间,2min。
注意事项:
试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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