还原型抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）含量测定试剂盒说明书

测定意义：
AsA 又称维生素 c。AsA 是辅酶、自 由 基 清 除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

测定原理：

在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐 B 反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物，在 吸收波长 420处测定吸光度。
自备仪器和用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶（棕色），4℃避光保存。临用前配制，每瓶加入 7 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂4℃下可保存 3 天。
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
AsA 测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 420 nm，蒸馏水调零。
2. 在 EP 管中加入下列试剂

注意：空白管只需测定一次。
AsA 含量计算公式:
标准曲线 y = 0.0088x - 0.018 ，R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷（Cpr×V 样）=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(细胞数量×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量
（4）按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088=113.63×(ΔA+0.018)
V 样：加入样品体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积，1.0 mL; Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）。
注意事项：
试剂三现配现用，配制好的 4℃保存，3 天内使用完。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。