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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1545 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876447S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876447S
用途范围 GSH-Px催化H2O2氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px 不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与 ROS 反应,生成氧化型谷胱甘肽 GSSG,从而保护生物膜免受 ROS 的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保 护 肝 脏、提 高 机 体 免 疫 力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗 辐 射等能力。



测定原理:

GSH-Px 催化有机过氧化物氧化 GSH,产生 GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化 NADPH 还原 GSSG,再生 GSH,同时 NADPH 氧化生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340nm 光吸收减少速率来计算 GSH-Px 活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,室温保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 10μL×1 支,-20℃保存。
试剂四:液体 200μL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
GSH-Px 测定操作:
1. 酶标仪预热 30 min,调节波长到 340 nm。
2. 混合试剂在 25℃或者 37℃(哺乳动物)水浴中预热 30min。
3. 混合试剂配制:临用前,在试剂二中加入试剂一 20 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀。(当天用完)
4. 试剂四的稀释:吸取 21.5μL 试剂四,加入 5mL 蒸馏水充分混匀,临用前配制,配制好的试剂当天使用。
5. 测定管:依次在 96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 预热的混合试剂、20μL 稀释后的试剂四,迅速混匀后于 340nm 处测定第 30 s 和第 210s 的吸光值,分别记为 A1 和 A2。△A 测定管= A1﹣A2。

GSH-Px 活性计算:
使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每 mg 蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (nmol/min/mg prot)=[△A÷ε÷d×V 反总×109]÷(Cpr×V 样)÷T=1072×△A÷Cpr
(2). 按样本质量计算
GSH-Px 活力单位定义:一定温度中,每 g 样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (nmol/min/g 鲜重)=[△A÷ε÷d×V 反总×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1072×△A÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:一定温度中,每 104个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (nmol/min/104 cell)= [△A÷ε÷d×V 反总×109]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1072×△A÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:一定温度中,每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (nmol/min/mL)=[△A÷ε÷d×V 反总×109]÷V 样÷T=1072×△A
ε:NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min。
注意事项:
(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
(2)混合试剂和底物液须临用前配制,配完后置于冰上,当天使用完;
(3)测定过程操作须迅速;
(4)细胞中 GSH-Px 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GSH-Px 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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