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离子结合型果胶(ISP)含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
912 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876395S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876395S
用途范围 利用酸溶液提取得到(WSP)可溶性果胶,采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在530 nm处有最大吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以 Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

测定原理:

利用带有螯合剂的酸溶液提取离子结合型果胶(ISP),采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在 530 nm 处有 吸收峰。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 100mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂三:标准液 1mL× 1 支,4℃保存。
试剂四:液体 5 mL× 1 瓶,4℃保存;

样品的前处理:
1、 细胞壁的提取:取约 0.3g 样本,加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀加入 1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g25℃离心 10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、 ISP 的提取:称取烘干的 CWM 3mg,加入 1mL 试剂二,充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入 1mL 试剂二匀浆,或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。

测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 530nm 处,蒸馏水调零;试剂三和试剂四 37℃预热10min 以上;
2、操作表:

2022110911023181341

2022110911023858161

混匀,95℃水浴 5min 后,冷却至室温,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,530nm 处读取吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为 A1、A2、A3 和 A4。若 A 大于 2,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释 10 倍或 20 倍)。空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
ISP 含量计算:
ISP 含量(mg /g 干重)= (C 标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
C 标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL; W:样本干重,g。
注意: 检测限为 50μg /g 干重

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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