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还原型抗坏血酸(AsA)/维生素C含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1508 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876466S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876466S
用途范围 抗坏血酸氧化酶(AAO)催化AsA氧化生成DHA,通过测定AsA的氧化速率,即可计算出AsA含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
AsA 又称维生素 C。AsA 是辅酶、自 由 基 清 除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。


测定原理:

在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐 B 反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在 吸收波长 420处测定吸光度。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低 温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2 瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入 7 mL 蒸馏水充分溶解,用不完的试剂 4℃下可保存 3 天。
样品中 AsA 提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
AsA 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 420 nm,蒸馏水调零。
2.在 EP 管中加入下列试剂

2022110902083921146

2022110902084720755

混匀,25℃静置 20min,吸取 200μL 加入微量石英比色皿/96 孔板中,420nm 下测定各管吸光值。ΔA=A 测定-A 空白。
注意:标准管只需测定一次。
AsA 含量计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线 y = 0.0088x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(Cpr×V 样)=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(细胞数量×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088=113.63×(ΔA+0.018)
V 样:加入样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线 y = 0.0044x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V 样÷(Cpr×V 样)=227.27×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=227.27×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V 样÷(细胞数量×V 样÷V 样总)=227.27×(ΔA+0.018)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0044=227.27×(ΔA+0.018)
V 样:加入样品体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
注意事项:
试剂三现配现用,配制好的 4℃保存,3 天内使用完。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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