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γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
437 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876435S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876435S
用途范围 γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
γ-GT 是 γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化 GSH 降解。γ-GT 催化 GSH 或者其他 γ-谷氨酰基化合物上的 γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化 GSH 和其他 γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新 陈 代 谢中起了重要的作用。


测定原理:

γ-GT 催化谷氨酰对硝基苯胺中 γ-谷氨酰基转移给 N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在 405nm 有特征光吸收;通过测定 405nm 光吸收增加速率,来计算 γ-GT 酶活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 14.8mL×1 瓶,4℃保存。
工作液(在试剂二瓶中配制):临用前配制,把试剂三倒入试剂二瓶中,充分溶解(室温过低时可以 40℃水浴促进溶解);然后把试剂四倒入试剂二瓶中,混匀后室温保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
γ-GT 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 405 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中预热 30min(保证无沉淀)。
3. 测定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,依次加入 20μL 上清液,180μL 工作液,混匀后于 405nm 测定 10s和 70s 时吸光度,记为 A1 和 A2。

γ-GT 活性计算:标准曲线:y=0.006x+0.0016,x 为对硝基苯胺浓度,y 为吸光值,R2=0.999。

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每克样本每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/g 鲜重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每 104个细胞每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V 反总÷V 样÷T= 1.67 × [ (A2-A1)-0.0016]V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V 样:反应体系中加入上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),1min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.003x+0.0016,x 为对硝基苯胺浓度,y 为吸光值,R2=0.999。
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=3.34× [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每克样本每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/g 鲜重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每 104个细胞每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化产生 1μmol 对硝基苯胺为 1 个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V 反总÷V 样÷T= 3.34 × [ (A2-A1)-0.0016]
V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量,g;V 样:反应体系中加入上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),1min。
注意事项:
1. 培养细胞中 γ-GT 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 γ-GT 的提取时可加试剂一后
2. 研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。
3. 配置好的工作液 2 周内使用完毕。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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