果胶甲酯化程度试剂盒说明书

注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。

测定原理：

果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与 2,4-戊二酮反应显色，在 412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在 70℃下与浓硫酸反应生成 5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与 3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在 450nm 下有 吸光值。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入 22mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂 4℃避光保存。

试剂六：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂七：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂八：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，弃上清，留沉淀。沉淀中加入 1mL 提取液，混匀后 90℃水浴 2h，冷却至室温，10000g4℃离心 10min，取上清待测。
测定操作表：
1．甲醇生成量测定：

1. 半乳糖醛酸含量测定：

计算公式：
1. 甲醇生成量计算
标曲为 y = 0.0298x + 0.009，R2 = 0.9997；x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为吸光值△A1。甲醇生成量（μmol/g 鲜重）=（ A1-0.009） ÷0.0298÷W×V 样总=33.56×（ A1-0.009）÷W
2. 半乳糖醛酸含量计算
标准曲线为 y = 0.2585x - 0.1746，R2 = 0.9986；x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为吸光值△A2。半乳糖醛酸（μmol/g 鲜重）=( A2+0.1746) ÷0.2585÷W×V 样总=3.87×( A2+0.1746)÷W
果胶甲酯化程度（%）=甲醇生成量÷半乳糖醛酸含量×
V 样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。