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硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
288 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876438S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876438S
用途范围 TrxR催化NADPH将DTNB还原为TNB,通过测定412nm波长处TNB的增加量,即可计算TrxR活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)试剂盒说明

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与 GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。


测定原理:

TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5 mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
TrxR 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。
3. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100μL 试剂二,100μL 试剂三,700μL 试剂一,100μL 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 和 310 s 吸光度,记为 A3 和 A4。△A 测定管=A2-A1。
TrxR 活性计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。

TrxR(nmol/min /mg prot)=△A 测定管÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T= 147×△A 测定管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样本每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min /g 鲜重)=△A 测定管÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 147×△A 测定管÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 104个细胞每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min/104 cell)=△A 测定管÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T= 147×△A 测定管÷ 细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1nmol DTNB 还原为 1 个酶活单位。
TrxR(nmol/min /mL)=△A 测定管÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T= 147×△A 测定管
ε:TNB 在 412nm 处的微摩尔消光系数,0.0136 L/μ mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积(L),1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:反应时间(min),5 min。
注意事项:
1. 测定前须先取 1~2 个样做预实验,哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用蒸馏水稀释 5倍左右;测定过程操作须迅速。
2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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