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谷胱甘肽还原酶(GR)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
395 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876441S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876441S
用途范围 GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH,有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外 GR 还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。



测定原理:

GR 能催化 NADPH 还原 GSSG 再生 GSH,同时 NADPH 脱氢生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,相反 NADP+在该波长无吸收峰;通过测定 340 nm 吸光度下降速率来测定 NADPH 脱氢速率,从而计算 GR 活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水
试剂组成和配置:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×2 支,-20℃保存。临用前加入 1.2mL 蒸馏水,混匀。
试剂三:粉剂×2 支,-20℃保存。临用前加入 0.6mL 蒸馏水,混匀。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
操作步骤:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一置于 25℃(普通物质)或者 37℃(哺乳动物)中预热 30min。
3. 测定管:取微量石英比色皿或 96 孔板,依次加入 10μL 试剂三,20μL 试剂二,150μL 试剂一,20μL 上清液,混匀,于 340nm 迅速测定初始吸光度和 180 s 吸光度,记为 A 测 1 和 A 测 2,△A 测定管= A 测 1﹣A 测 2。
注 意:

1.加完上清液后必须迅速混匀测定,保证准确测出初始反应速度;
2.当出现初始 180s 内吸光值不稳定时,可以适当延长反应时间,选取相对稳定的时间段内吸光值变化值;
3.当所测△A 测定管的值在零点附近徘徊时,可能原因:(1)样本 GR 酶活性低,建议浓缩样本后再进行测定;(2)样本 GR 酶活性过高,吸光值变化区间过小无法准确测出,建议样本稀释 2~5 倍后再进行测定)
计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109]÷[Cpr×V 样]÷T= 536×△A 测定管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每克样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/g 鲜重)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 536×△A 测定管÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每 104个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 536×△A 测定管÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mL)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T= 536×△A 测定管
ε:NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109]÷[Cpr×V 样]÷T= 1072×△A 测定管÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每克样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/g 鲜重)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 1072×△A 测定管÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每 104个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ △A 测定管÷ε÷d×V 反总×109] ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T =1072×△A 测定管÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在一定温度中,pH8.0 条件下,每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmol/min/mL)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷×V 样÷T=1072×△A 测定管
ε:NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL =2×10-2 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;V 样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,3min。
注意事项:
(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,匀浆液避免反复冻融;
(2)试剂二和试剂三须现配现用,配制完后,置于冰上,未使用完的 4℃保存,三天内使用完。
(3)测定前须先用 1~2 个样做预实验,哺乳动物组织一般须用试剂一稀释 2~5 倍。
(4)细胞中 GR 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GR 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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