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谷胱甘肽S转移酶(GST)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
437 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876443S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876443S
用途范围 GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST 是体内解 毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此,GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因为 GST 具有 GSH-Px 活性,亦称为 non-SeGSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。注意,GST 催化的反应减少 GSH 含量,但是不增加 GSSG 含量。



测定原理:

GST 催化 GSH 与 CDNB 结合,其结合产物的光吸收峰波长为 340nm;通过测定 340nm 波长处吸光度上升速率,即可计算出 GST 活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 22mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 2 mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 340 nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)保温。
3. 测定管:取微量石英比色皿或 96 孔板,加入 20μL 上清液,180μL 试剂二和 20μL 试剂三,迅速混匀后于 340nm 测定吸光度变化,记录 10 s 和 310 s 吸光度为 A1 和 A2。
GST 活性计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/mg prot)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=230×(A2-A1) ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样品每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/g 鲜重)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=230×(A2-A1)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 104 个细胞每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/104 cell)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=230×(A2-A1) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/mL)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷V 样÷T = 230×(A2-A1)
ε:产物摩尔消光系数,9.6×103 L/mol /cm;d:比色皿光径,1cm;106:1mol=1×106μmol;V 反总:反应体系总体积,220μL=2.2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),5min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/mg prot)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=460×(A2-A1) ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样品每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/g 鲜重)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=460×(A2-A1)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 104 个细胞每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/104 cell)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=460×(A2-A1)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1nmol/L CDNB 与 GSH 结合为 1 个酶活单位。
GST(nmol/min/mL)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V 反总÷V 样÷T =460×(A2-A1)
ε:产物摩尔消光系数,9.6×103 L/mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;106:1mol=1×106μmol;V 反总:反应体系总体积,220μL=2.2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),5min。
注意事项:
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
2. 细胞中 GST 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GST 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞;
3. 本法测定 GST 活性的线性范围可达 76 μmol/min /L,测定前先用 1~2 个样做预实验,如 5min 内反应不成线性,须对样品用蒸馏水稀释,计算结果乘以稀释倍数;
4. 测定反映的温度对测定结果有影响,请控制在 25℃或者 37℃(哺乳动物)。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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