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还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
334 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876450S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876450S
用途范围 DTNB与GSH反应生成复合物,在412nm处有特征吸收峰;其吸光度与GSH含量成正比。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)试剂盒说明书

注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GSH 是细胞内最主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内 GSH 和 GSSG含量以及 GSH/GSSG 比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。





测定原理:

DTNB 与 GSH 反应生成复合物,在 412nm 处有特征吸收峰;其吸光度与 GSH 含量成正比。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
GSH 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,依次加入 20μL 蒸馏水,140μL 试剂二,40μL 试剂三,混匀静置 2min 后测定 412 nm 吸光度 A1。
4. 测定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,依次加入 20μL 上清液,140μL 试剂二,40μL 试剂三,混匀静置 2min 后测定 412 nm 吸光度 A2。
注意:空白管只需要测定一次。
GSH 含量计算公式:
GSH 标准曲线公式:y=1.5 x(x 为 GSH 浓度,μ mol /mL;y 为吸光值)
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V 样÷(V 样×Cpr) =0.667×(A2-A1) ÷Cpr
(2)按样本质量计算
GSH(μ mol/g 鲜重)=(A2-A1) ÷1.5×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=0.667×(A2-A1) ÷W
(3)按细胞数量计算
GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=0.667×(A2-A1) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V 样÷V 样 =0.667×(A2-A1)
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
GSH 标准曲线公式:y=0.75x(x 为 GSH 浓度,μ mol /mL;y 为吸光值)
(1)按蛋白浓度计算
GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷0.75×V 样÷V 样÷Cpr =1.334×(A2-A1) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
GSH(μ mol/g 鲜重)=(A2-A1) ÷0.75×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=1.334×(A2-A1) ÷W
(3)按细胞数量计算
GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷0.75×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=1.334×(A2-A1) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷0.75×V 反总÷V 样 =1.334×(A2-A1)
V 样总:上清液总体积,1mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。
注意事项:
1. 试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。
2. 检出限为 0.011mmol/L。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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