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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
322 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-877323S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877323S
用途范围 利用2-VP法测GSSG含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书

注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GSH/GSSG 是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。





测定原理:

利用 2-VP 法测 GSSG 含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 300μL×1 支,4℃保存。
试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五: 液体 30μL×1 瓶,-20℃保存。临用前加入 0.6 mL 试剂三稀释,4℃保存。
试剂六:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 40 mL 试剂三溶解,现配现用。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂
一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清液(如上清不清澈,再离心 3min)待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心 3min)的蒸馏水混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 30min。
3. 测定管:取 1 mL EP 管,加入 100 μ L 上清液,5μ L 试剂二,盖紧后混匀,置于 37℃水浴 30min;依次加入 100 μ L 试剂四,10 μ L 试剂五,700 μ L 试剂六,迅速混匀后,立即测定 30 s 和 150 s 光吸收 A1 和A2,计算ΔA=A2-A1。
GSSG 含量计算公式:
1、标准条件下测定的回归方程为 y=0.0276x-0.0011;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样×Cpr)=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=36.23×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=36.23×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG(nmol/mL)=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷V 样=36.23×(ΔA+0.0011)
V 样:反应中加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/mL)
注意事项:
1. 提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2. 临用前配制的试剂配好后 4℃保存,2 天内使用完毕。
3. 检出限为 0.1μmol/L。
4. 反应温度.严格来说,为保证重复性,应在 25℃下进行反应。
5. 反应时间需 控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。
6. 样品中的 GSSG 浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀释倍数要尽量大些。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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