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胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
299 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876424S
用途范围 利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应,在340 nm下测定NADPH浓度的增加。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒说明书

注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

ICDHc(EC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

测定原理:

利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。
 
所需的仪器和用品: 
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂的组成和配制: 
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 50 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存;
 
样本的前处理: 
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂二转移至试剂一中充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴中预热 10min 左右;用不完的试剂 4℃保存。
3、 在试剂三中加入 550μL 蒸馏水充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴中预热 10min左右;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
4、 在试剂四中加入 550μL 蒸馏水充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴中预热 10min左右;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
5、 操作表:

2022110912104990625
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,加样本的同时开始计时;混匀,在 340nm 波长下记录 20s 时的初始吸光度 A1 和 2min20s 时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
注意事项:
1、 若 A2-A1 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、 若 A2-A1 小于 0.005,可延长反应时间到 5min 或 10min。
ICDHc 活力单位的计算:
1、血清(浆)ICDHc 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=2143×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 ICDHc 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=2143×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=2143×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(nmol/min /104)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=4.285×ΔA
V 反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.03 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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