总抗氧化能力(T-AOC)测定试剂盒

注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

一、测定意义：
机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系，该防御体系有酶促与非酶促两个体系，许多酶是以微量元素为活性中心，例如：超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽 S-转移酶（GST）等，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。

二、测定原理：

机体中有许多抗氧化物质，能使 Fe3+还原成 Fe2+，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。

三、试剂组成和配制：

四、操作步骤：
（一）、血清(浆)中 T-AOC 的测定（样本前处理详见附录Ⅰ）：

（二）、组织中 T-AOC 的测定（样本前处理详见附录Ⅰ）

(三)、全血中 T-AOC 的测定（样本前处理详见附录Ⅰ）：
1、操作步骤：
⑴、前处理：将全血按照一定比例用双蒸水进行破碎（一般按照全血：双蒸水=1:9 处理），制备溶血液，待测。
⑵、操作表：

混匀，放置 10 分钟，波长 520nm，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

参考取样量：全血一般用双蒸水 1：9 稀释取 0.05ml。

五、简便操作表：
混合试剂的配制：
试剂一 : 试剂二 : 试剂三 ＝ 1 : 2 : 0.5 的比例进行配制，现用现配
1、血清（浆）、全血简便操作表：

例如：VE、胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径：（1）消 除 自 由 基和活性氧以免引发脂质过氧化；（2）分解过氧化物，阻断过氧化链；（3）除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到了协同作用，以及代 偿 作 用与依赖作用。
附录Ⅰ：T-AOC 测定样本前处理
1、血浆样本前处理：
血浆在测试前 3500 转／分离心 10 分钟，取上清待测，否则有些抗凝剂会引起沉淀及混浊，肝素抗凝的血浆不要离心，血清不需要离心。
2、组织样本的前处理：
组织匀浆的制备：
准确称取组织重量，按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成 10%的匀浆液，2500 转/分离心 10 分钟，取上清液待测。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
3、培养细胞的前处理：
培养细胞悬液的制备：
将培养细胞消化，离心，弃上清，留下层细胞，用生理盐水或匀浆介质制备成 107/cm3 的悬液，即 107/ml的悬液，再进行破碎。破碎细胞的方法有三种：
①、用匀浆器匀浆。（可以用匀浆机，也可以用玻璃匀浆器手工匀浆。）
②、用进口的超声粉碎器粉碎。
③、反复冻溶 3 次。（第③种方法有时会影响酶活力。）制备好的细胞悬液不需要离心，在测试加样前要摇匀后取样。同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白。
4、培养细胞的上清及部分体液均可以按照血清样本处理，一般直接加样。
5、全血样本前处理：一般用双蒸水 10 倍稀释，具体稀释倍数及取样量要做预试。

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