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多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
970 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876398S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876398S
用途范围 多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonase,PG)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。

测定原理:

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 16000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液:直接检测。
测定操作表:

2022110910530148365

2022110910530843426

酶活性计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量
V 反总:反应总体积,0.15mL;V 样:反应中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.9821x - 0.008,R
2 = 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/mg prot)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG 活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG 活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷V 样÷T=5.045×(ΔA+0.008)

4. 按细胞数量计算
酶活性定义:在 40℃,pH6.0 条件下,每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG 活性(mg/h/104cell)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量
V 反总:反应总体积,0.15mL;V 样:反应中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h
注意事项:
煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟,以将酶 灭活。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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