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果胶裂解酶测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
440 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876405S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-09
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876405S
用途范围 果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。

测定原理:

果胶裂解酶作用于果胶中的 α-1,4 糖苷键,生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在 235nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
测定操作表:

2022110910380268175

酶活性计算公式:
1. 组织中 PL 活性
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在 40℃,pH5.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mg prot)= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 64.1×A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在 40℃,pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/g 鲜重)= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 64.1×A÷W
2. 细胞 PL 活性
酶活性定义:在 40℃,pH5.5 条件下,每 104个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/104cell)= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 64.1×A÷细胞数量
3. 培养液 PL 活性
酶活性定义:在 40℃,pH5.5 条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL 活性(nmol/min/mL)= A÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T= 64.1×A
ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,1mL;
V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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