总巯基测定试剂盒说明书

注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理：

巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有 吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2 mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 按照组织质量（g）：水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清，培养液：稀释 5 倍后测定，可取 0.1mL 样本，加入 0.4mL 蒸馏水，混匀，置冰上待测。
操作步骤：
1、分光光度计预热 30min，调节波长至 412nm，双蒸水调零。
2、操作表在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂

计算公式：
总巯基标准曲线：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x 为标品浓度，单位 μmol/mL， y 为吸光度ΔA。
1. 组织：
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V 样总÷W=0.276×（ΔA+0.0037）÷W

总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V 样总÷Cpr=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×103=1380×（ΔA+0.0037）
V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/L=103μmol/ L
注意事项：
检出限为 10μmol/L。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。