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吲哚乙酸氧化酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
970 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 发布日期: 2022-11-09
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892802S
用途范围 在无机酸存在情况下,吲哚乙酸能与FeCl3作用,生成红色螯合物,该物质在530nm处有最大吸收峰,酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

吲哚乙酸氧化酶活性测定试剂盒说明书



注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。

测定原理:

在无机酸存在情况下,吲哚乙酸能与 FeCl3 作用,生成红色螯合物,该物质在 530nm 处有 吸收峰,酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、1.5mL 离心管、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂六:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。临用前吸取 1mL 试剂五加入试剂六中混匀,待用,避光保存
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 530 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二、试剂三、试剂四置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 20min。
3. 取 1.5mL EP 管若干,按操作依次加入试剂,操作表如下:

2022110908473141047

2022110908475136580

IAA 氧化酶活性计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
IAA 标准曲线公式:y = 1.334x + 0.025 R2 = 0.998 (x 为 IAA 浓度,mmol /L;y 为吸光值)
(1) 按蛋白浓度计算
酶活定义:从开始时加入的 IAA 量减去酶作用后残留的 IAA 含量,即得被酶所催化的 IAA 含量。以每 mg酶蛋白在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。U(μmol/h/mg prot)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 样÷(V 样×Cpr)÷T=1.5×(A1-A2)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
酶活定义:以每 g 样本在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U(μmol/h/g 鲜重)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=1.5×(A1-A2)÷W
(3) 按细胞数量计算
酶活定义:以每 1 万个细胞在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。U(μmol/h/104 cell)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=1.5×(A1-A2)÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活定义:以每 mL 酶液在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U(μmol/h/mL)=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 样÷(V 样÷V 样总) ÷T=1.5×(A1-A2)

V 样总:上清液总体积,1mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g,T:反应时间,0.5h。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
IAA 标准曲线公式:y = 0.667x + 0.025 R2 = 0.998 (x 为 IAA 浓度,mmol /L;y 为吸光值)
(1)按蛋白浓度计算
酶活定义:从开始时加入的 IAA 量减去酶作用后残留的 IAA 含量,即得被酶所催化的 IAA 含量。以每 mg酶蛋白在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。U(μmol/h/mg prot)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V 样÷(V 样×Cpr)÷T=3×(A1-A2)÷Cpr(2)按样本鲜重计算
酶活定义:以每 g 样本在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U(μmol/h/g 鲜重)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=3×(A1-A2)÷W
(3)按细胞数量计算
酶活定义:以每 1 万个细胞在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U(μmol/h/104 cell)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=3×(A1-A2)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
酶活定义:以每 mL 酶液在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U(μmol/h/mL)=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V 样÷(V 样÷V 样总) ÷T=3×(A1-A2)
V 样总:上清液总体积,1mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g,T:反应时间,0.5h。
注意事项:
检出限为 0.01μmol/mL。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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