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Na+k+ ——ATP酶测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
38 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 发布日期: 2022-11-08
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876296S
用途范围 Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

Na+K+- ATP 酶活性测定说明书


注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Na+K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。

测定原理:

Na+K+-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5ml×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×3 支,-20℃保存。用时每支加 1mL 蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂六:粉剂×1 瓶,4℃保存。用时加入 3mL 蒸馏水, 4℃保存。
试剂七:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水,溶解后 4℃保存一周。
试剂八:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水,溶解后 4℃保存一周。
试剂九: 液体 25mL×1 瓶,室温保存。
试剂十:10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4℃保存。0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将贮备液 20 倍稀释,即取 0.1mL 试剂十加 1.9mL 蒸馏水充分混匀。
定磷剂的配制:按 H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

样品酶液的制备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 660nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应(在 EP 管中加入下列试剂)
2022110810195973034

注意:
1、由于每一个样都必须做对照,本试剂盒 50 管保证测 24 份 Na+K+-ATP 酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。
3、空白管和标准管只要做一管。

计算:
1、血清(浆)Na+K+- ATPase 活力的计算:
定义:每小时每毫升血清(浆)中 Na+K+- ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h/mL)=[C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷V 样÷T=7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2、组织、细菌或细胞中 Na+K+- ATPase 活力的计算:
(1)按蛋白浓度计算:
定义:每小时每毫克组织蛋白中 Na+K+- ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /mg)= [C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(Cpr×V 样)÷T =7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
定义:每小时每克组织中 Na+K+-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h/g)= [C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W× V 样÷V 样总)÷T=7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
定义:每小时每 1 万个细菌或细胞中 Na+K+-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP 酶活力(μmol/h /104)= [C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.015×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V 总:酶促反应总体积,0.5mL;V 样:加入样本体积,0.2mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1/6 小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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