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ATP含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
780 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876310S
  • 发布日期: 2022-11-08
  • 更新日期: 2022-11-08
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876310S
用途范围 ATP在254 nm下有吸收峰,可以利用高效液相色谱法测定其含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

ATP 含量试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。


测定原理:

肌酸激酶催化肌酸和 ATP 反应生成磷酸肌酸,可在 700nm 下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应 ATP 含量。
 
自备仪器和用品: 
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
酸性提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 支,4℃保存;临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 300μL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
标准液:液体 10mL×1 瓶,1μmol/mLATP 标准液,4℃保存;
ATP 提取:
1、血清(浆)中 ATP 的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4 ℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
2、组织中 ATP 的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清至另一 EP 管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、细胞或细菌中 ATP 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):酸性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液),超声波破碎 1min(冰浴,强度 20%或 200W,超声 2s,停 1s),8000g 4 ℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
测定步骤: 
1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 700nm,蒸馏水调零。
2、显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.87m L),按试剂四(mL):试剂五(mL)=1:
5 的比例配制。用多少配多少。
3、样本测定:
2022110809414880889

注意:空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。
ATP 含量计算: 
1、血清(浆)中 ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL)=[C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2、组织、细菌或细胞中 ATP 含量计算
(1)按蛋白浓度计算
ATP 含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr)=1×(A测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr蛋白质含量需要另外测定。
(2)按样本鲜重计算
ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
ATP 含 量 (μmol/104 cell ) =[C 标 准 管 ×(A 测 定 管 - A 对 照 管 )÷(A 标 准 管 - A 空 白 管 )×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)C 标准管:标准液浓度,1μmol/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
注 意: 检测限为 10nmol/mL 或 10nmol/g 鲜重或 0.1nmol/mg prot

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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