ATP 含量试剂盒说明书

注 意 ：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。


测定原理：

肌酸激酶催化肌酸和 ATP 反应生成磷酸肌酸，可在 700nm 下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应 ATP 含量。
 
自备仪器和用品： 
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
 
试剂组成和配制： 
酸性提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 支，4℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 300μL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
标准液：液体 10mL×1 瓶，1μmol/mLATP 标准液，4℃保存；
ATP 提取：
1、血清（浆）中 ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
2、组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
3、细胞或细菌中 ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：酸性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液），超声波破碎 1min（冰浴，强度 20％或 200W，超声 2s，停 1s），8000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
测定步骤： 
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 700nm，蒸馏水调零。
2、显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87m L），按试剂四(mL)：试剂五（mL）=1：
5 的比例配制。用多少配多少。
3、样本测定：

注意：空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。
ATP 含量计算： 
1、血清（浆）中 ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管)
2、组织、细菌或细胞中 ATP 含量计算
（1）按蛋白浓度计算
ATP 含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr）=1×(A测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管)÷Cpr蛋白质含量需要另外测定。
（2）按样本鲜重计算
ATP 含量（μmol/g 鲜重)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
ATP 含 量 (μmol/104 cell ） =[C 标 准 管 ×(A 测 定 管 － A 对 照 管 )÷(A 标 准 管 － A 空 白 管 )×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管)C 标准管：标准液浓度，1μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，2mL；V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
注 意： 检测限为 10nmol/mL 或 10nmol/g 鲜重或 0.1nmol/mg prot

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。