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线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
2695 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876312S
  • 发布日期: 2022-11-08
  • 更新日期: 2022-11-08
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876312S
用途范围 复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

线粒体复合体Ⅱ试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶 Q 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基 FAD 还原为 FADH2,后者进一步还原氧化型辅酶 Q 生成还原型辅酶 Q,是呼吸电子传递链的支路。


测定原理:

复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶 Q 可进一步还原 2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有特征吸收峰,通过检测 2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
 
需自备的仪器和用品: 
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1.5mL×1 支,-20℃保存;
试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂六:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存;
 
样本的前处理: 
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g,4℃离心 5min。
3、 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ(此步可选做)。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声 3s,间隔 10 秒,重复 30 次),用于复合体Ⅱ酶活性测定。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 605nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配制:临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、25μL 试剂六和 200μL 工作液,立即混匀,记录605nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。
复合体Ⅱ活力单位的计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=559×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=113×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T =0.226×ΔAV 反总:反应体系总体积,2.35×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=1118×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=226×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.452×ΔAV 反总:反应体系总体积,2.35×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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