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布鲁氏杆菌(bcsp31基因)探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
  • 品牌:联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-11980
  • 价格: ¥4490/盒
  • 发布日期: 2022-11-07
  • 更新日期: 2024-03-28
产品详请
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-11980
用途范围 仅供科研
纯度 %
规格 50次

布鲁氏杆菌(bcsp31基因)探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

布鲁氏杆菌(Brucella spp.)是一种细胞内寄生小球杆状菌,革兰氏染色阴性,主要感染动物,牛、羊、猪、狗以及骆驼、鹿等动物,主要是通过接触感染的动物或者吃被感染的食物以及实验室接触等方式传播给人类。能引起人和多种动物的急性和慢急性疾病,被感染的人和动物表现为流 产及不 孕 不 育等症 状,因此布鲁氏杆菌属通用的快速准确鉴定对该病的预 防 和 检 疫 有 着 重 要 作 用,本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测布鲁氏杆菌(bcsp31 基因)型的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,分析灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据布鲁氏杆菌(bcsp31 基因)高度保守区设计,不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

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运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同。
3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
7. 如果有 N 个样品, 设置 N+2 个提取,多出的是 PC(样品制备阳性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液 10μL 再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout 或免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 RT-PCR 管,其中 N+2个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 RT-PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个RT-PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 RT-PCR阴性对照(用水做模板),1 个用于 RT-PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

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五、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 36。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 36 则为阳性。如果在 36-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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