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Sindbis Virus(SINV)辛德毕斯病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
4490 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-45200
  • 发布日期: 2022-11-07
  • 更新日期: 2022-11-07
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-45200
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Sindbis Virus(SINV)辛德毕斯病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,SINV)属于披膜病毒科甲病毒属,为甲病毒属的代表株。库蚊和伊蚊是其传播媒介,鸟类和家畜等脊椎动物为其宿主,辛德比斯病毒感染为人畜共患病,可引起人体发热、头 痛、皮疹、关 节 炎甚至脑 炎,与登 革 热、基孔肯雅热等其他虫媒病毒病 症 状类似。因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测辛德毕斯病毒的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2.引物和探针经过优化,分析灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据辛德毕斯病毒RNA高度保守区设计,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
6.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221107090446470472022110709050247237

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
用带芯枪头分别加入45 μL荧光RT-PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,
2.下同)。
3.在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的相关RNA提取产品或免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分

样品管

N+2

RT-PCR阴性对照

标准曲线样品管

1-6管)

探针法 qRT-PCR 缓冲液

各10 μL

10 μL

各10 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液

各2 μL

2 μL

各2 μL

辛德毕斯病毒RT-PAR

引物-探针混合液

各3 μL

3 μL

各3 μL

N+2个待测RNA样本

各5 μL

不加

不加

超纯水

不加

5 μL

不加

第6步所得标准曲线样品稀释液(1-6号)

不加

不加

各5μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行RT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

10 min

预变性

95℃

10 min

RT-PCR反应

(45个循环)

95℃

5 sec




58℃

20 sec(采集FAM通道的荧光信号)

五、数据处理
11.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于45。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于40。对待测样品,如果其Ct大于或等于45则为阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果在40-45之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于45则为阴性,如果小于40,则为阳性。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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