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Simian Virus 5 (SV5)猴病毒5 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
4490 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-19760
  • 发布日期: 2022-11-07
  • 更新日期: 2022-11-07
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-19760
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Simian Virus 5 (SV5)猴病毒5 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

副流 感病毒属于单链 RNA 病毒,包括许多知名的人类病毒和动物病毒。所有的副流 感病毒都是通过呼 吸 道的传播途径进行传播,而且很多都能引起急性的疾病,并且具有非常强的传 染 性。其中副流 感病毒 5 型可感染多个物种,比如:猴子、猪、猫、仓鼠、豚鼠等动物,也能感染人类。因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的副流 感病毒5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒,它具有下列特点:
1.一站式,不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.特异性高,引物是根据副流 感病毒5型高度保守区设计,具有良好的特异性。
4.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221107085911459682022110708591869619

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所
5.得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各10 μL

副流 感病毒5型RT-PCR探针

1 μL

1 μL

各1 μL

副流 感病毒5型探针法RT-PCR引物混合液

2 μL

2 μL

各2 μL

N+2个待测DNA模板

7 μL

-

-

超纯水

-

7 μL

-

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)

-

-

各7 μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 qRT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

30min

预变性

95℃

5 min

RT-PCR反应


95℃

15sec

(40个循环)

60℃

1 min(采集FAM通道的荧光信号)

四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于30则为阳性。如果在30-40之间,则重复一次。若重复结果 Ct 值小于40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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