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Rift Valley Fever Virus(RVFV)裂谷热病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
4490 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-76400
  • 发布日期: 2022-11-04
  • 更新日期: 2022-11-04
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-76400
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Rift Valley Fever Virus(RVFV)裂谷热病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)是一种RNA病毒,病毒主要经蚊叮咬或通过接触染疫动物传播给人,多发生于大雨季节。病 毒 性出血 热可导致动物和人的严重疾病,引起严重的公共卫生问题和因牲畜减少而导致的经济下降问题,人感染病毒2-6天后,突然出现流 感样疾病表现,发热、头 痛、肌 肉 痛、背 痛,一些病 人可发展为颈硬、畏 光和呕吐,在早期,这类病 人可能被误诊为脑 膜 炎。人类染上裂谷热病毒后病死率通常较低,但每当洪水季节来临,在肯尼亚和索马里等非洲国家则会有数百人死于该病,因此裂谷热病毒的快速准确鉴定对该病的预 防 和 检 疫 有 着 重 要 作 用。
本产品以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测裂谷热病毒的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2.引物和探针经过优化,分析灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据乙 型 肝 炎病毒前基因组RNA高度保守区设计,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221104091535281112022110409154157264

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光RT-PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的是PC(样品制备阳性对照)和NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的10000倍稀释液10μL再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒RNAout或免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),1个用于RT-PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分/每管

样品管

N+2

RT-PCR阴性对照

标准曲线样品管

2-7管)

探针法qRT-PCR缓冲液

10 μL

10 μL

10 μL

探针法qRT-PCR酶混合液

2 μL

2 μL

2 μL

裂谷热病毒探针法qRT-PCR引物-探针混合液

3 μL

3 μL

3 μL

N+2个待测RNA样本

5 μL

不加

不加

自备超纯水

不加

5 μL

不加

第6步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)

不加

不加

5μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行RT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

20 min

预变性

94℃

5 min

RT-PCR反应

(45个循环)

94℃

20 sec


62℃

20 sec(采集FAM通道的荧光信号)


72℃

40 sec

五、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于38。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于38则为阳性。如果在38-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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