联系方式
地址:上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
联系人:周经理
电话:021-67680335
手机:13052188602
邮箱:shlmai@163.com
网址:www.shlmai.com
Coxsakie Virus(CV)柯萨奇病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
4490 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-17200
  • 发布日期: 2022-11-01
  • 更新日期: 2022-11-01
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-17200
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Coxsakie Virus(CV)柯萨奇病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

。柯萨奇病毒(Coxsackie Virus)是一种肠病毒(enterovirus),直径为28nm,核酸为单股RNA。该病毒可在多种组织细胞中增殖,并引起细胞病 变。根据致病特点不同,柯萨奇病毒分为A、B两组。A组有23个血清型,B组分有6个血清型,柯萨奇病毒A型感染儿童多见,典型症 状为疱 疹性咽峡炎,据调查伴有口咽部疱 疹和皮疹的急性热病中,79%为柯萨克A组病毒所致。柯萨奇B组病毒感染引起特征性传 染 性胸肋 痛病。柯萨奇病毒对人类健康产生了较大威胁,因此快速灵敏检测柯萨奇病毒具有重要意义。本产品就是为此目的根据探针法荧光定量RT-PCR原理开发的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2.引物和探针经过优化,分析灵敏性高,可以达到100拷贝左右/反应。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据柯萨奇病毒RNA高度保守区设计,可以检测各A组的23个血清型和B组的6个血清型,不会跟其他病毒RNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
6.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221101101728104122022110110173404119

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2.用带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同)。
3.在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在4号管中加入5μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的相关RNA提取产品或免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):


成分

样品管

N+2

RT-PCR阴性对照

标准曲线样品管

1-6管)

探针法 qRT-PCR 缓冲液

各10μL

10μL

各10μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液

各2μL

2μL

各2μL

柯萨奇病毒探针法qRT-PCR

引物-探针混合液

各3μL

3μL

各3μL

N+2个待测RNA样本

各5μL

不加

不加

超纯水

不加

5μL

不加

第6步所得标准曲线样品稀释液(1-6号)

不加

不加

各5μL(1号样到1号管,2号样到2号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行RT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

30 min

预变性

95℃

10 min

RT-PCR反应

(45个循环)

95℃

15 sec


60℃

1min(采集FAM通道的荧光信号)

五、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于45。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于40。对待测样品,如果其Ct大于或等于45则为阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果在40-45之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于45则为阴性,如果小于40,则为阳性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

联系方式
手机:13052188602
电话:021-67680335
Q Q:
手机访问官网
Copyright © 2022 上海联迈生物工程有限公司 XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网