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猪链球菌荚膜多糖(CPS)毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒
  • 品牌:联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-18911
  • 价格: ¥3990/盒
  • 发布日期: 2022-10-31
  • 更新日期: 2024-03-28
产品详请
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-18911
用途范围 仅供科研
纯度 %
规格 50次

猪链球菌荚膜多糖(CPS)毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

猪链球菌( Streptococcus suis ,SS)是一种重要的人兽共患病原菌 ,主要引起猪脑 膜 炎、关 节 炎、心 内 膜 炎、败 血 症、突然死亡 ,人急性脑 膜 炎、感 染 性 休 克综合征等。近年来 ,许多国家和地区不断有猪链球菌爆发和流行的报道。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原性的不同 ,分为 35 个血清型(1~34 型 ,1/2 型) 。 范围内以 SS2 流行最广 ,致病性 。猪链球菌主要毒力基因包括荚膜多糖合成酶(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp) 、胞外因子(epf)、溶血素 (sly)、毒力相关序列 (orf2)、纤粘连蛋白/纤粘连蛋白结合蛋白(fbps)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、甘油醛 232 磷酸脱氢酶 (gapdh)。猪链球菌的致病性强弱与其毒力因子密切相关 ,欧美等国家对部分毒力因子的分布情况已有所报道。鉴于毒力因子检测在本病临床诊断及流行病学监测中的重要价值,因此猪链球菌荚膜多糖(CPS)毒素基因的快速准确鉴定对该病的预 防 和 有 着 重 要 作 用。本产品就是以探针法荧光定量PCR 技术为基础开发的专门检测猪链球菌荚膜多糖(CPS)毒素基因的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据猪链球菌荚膜多糖(CPS)毒素基因 DNA 高度保守区设计,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

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运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 样品 DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同。
3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品待提取, 设置 N+2 个提取,多出的是 PC(样品制备阳性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液10μL 再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模4板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

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四、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值,再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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