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乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
3990 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-33600y
  • 发布日期: 2022-10-31
  • 更新日期: 2022-10-31
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-33600y
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

乳酸杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

乳酸杆菌(Lactobacillus,LB)是指能使糖类发酵产生乳酸的细菌,是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物,它维护人体健康和调 节 免 疫 功 能 的 作 用已被广泛认可。乳酸杆菌属乳酸杆菌科,因发酵糖产生大量乳酸而命名,其存在广泛,嗜酸性,生存最适ph为5.5~6.0,在ph3.0~4.5的环境中仍然能生存,它在无芽胞杆菌中是耐酸力 的。乳酸杆菌还可以用来 妇 科 炎 症、儿童艾 滋 病、儿童糖 尿 病、畜禽肠 道 疾 病等,具有较高的医疗价值,因此快速检测乳酸杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传 染 性 疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测乳酸杆菌的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据人乳酸杆菌高度保守的VP1区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221031085555727272022103108560144756

运输及保存 低温运输,-20℃保存,
自备试剂 样品DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传 染 性 病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传 染 性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。

2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂,本产品的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix(本色盖)

10 μL

10 μL

各10 μL

乳酸杆菌 qPCR探针(绿盖)

2 μL

2 μL

各2 μL

乳酸杆菌 PCR引物混合液(白盖)

2 μL

2 μL

各2 μL

待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)

不加

不加

各6μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

10 s

PCR反应

(40个循环)

95℃

5 s


60℃

34 s(采集FAM通道的荧光信号)


72℃

0.5 min

延伸

72℃

10 min

五、数据处理
12.以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
六、电泳检测
如果有必要电泳确认,可取10-20 uL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境,建议不轻易采纳。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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