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人线粒体DNA 探针法荧光定量PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
3990 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-190701y
  • 发布日期: 2022-10-31
  • 更新日期: 2022-10-31
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-190701y
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

人线粒体DNA 探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

线粒体是真核生物产生能量的重要细胞器,它具有自身的基因组,线粒体DNA和细胞核DNA共同决定真核生物的表现型,因此研究线粒体DNA具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测人线粒体DNA的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据人线粒体DNA的高度保守区设计,in silico分析发现其不会跟其他DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
6.既可用于定性,又可用于定量,用于定量时线性范围至少有5个数量级。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221031084752260682022103108480158034

运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 样品DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1.标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同)。
3.在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品, 设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL 第4号稀释液(第6步所得)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为样本制备PC。另外用水作为样本制备NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA,本扩增试剂盒跟市场上大多数线粒体DNA提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(可直接用第6步所得的第4号稀释液)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线样品管

1-6管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

人线粒体DNA探针法qPCR引物-探针混合液

3 μL

3 μL

3 μL

N+2个待测DNA模板

7 μL

不加

不加

超纯水

不加

7 μL

不加

6所得标准曲线样品稀释液1-6

不加

不加

7μL(1号样1号管2号样2号管

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

2022103108501553062

2022103108502429186

五、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于35。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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