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| 产地 | 中国/上海 |
| 品牌 | 联迈生物 |
| 货号 | LM815-109 |
| 用途 | 仅供科研 |
| 包装规格 | 50次 |
| 纯度 | % |
| CAS编号 | |
| 是否进口 |
火鸡源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
产品及特点
规格及成分
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液， 用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品（也充当PCR阳性对照）。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加）：
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成分 |
样品管 N+2个 |
PCR阴性对照管 |
标准曲线 样品管（2-7管） |
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2×Probe qPCR MagicMix |
10 μL |
10 μL |
各10 μL |
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火鸡源性成分探针法qPCR阳性对照（1×10E8拷贝/uL） |
1 μL |
1 μL |
各2 μL |
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火鸡源性成分探针法qPCR 引物混合液 |
2 μL |
2 μL |
各2 μL |
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待测样品DNA模板 |
7 μL |
不加 |
不加 |
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第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） |
不加 |
不加 |
各7μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
四、qPCR反应参数
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过程 |
温度 |
时间 |
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预变性 |
94℃ |
5 min |
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PCR反应 （35个循环） |
94℃ |
0.5 min |
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60℃ |
0.5 min（采集FAM通道的荧光信号） |
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72℃ |
0.5 min |
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延伸 |
72℃ |
10 min |
五、数据处理
11.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
