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Varroa destructor狄斯瓦螨探针法荧光定量PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
3990 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-43020y
  • 发布日期: 2022-10-27
  • 更新日期: 2022-10-27
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-43020y
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Varroa destructor狄斯瓦螨探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

狄斯瓦螨(Varroa destructor)是对 养蜂业威胁 的蜜蜂病虫害。200年重新命名之前,它一直被称为雅氏瓦螨(Varroa jacobsoni Oudemans1904)。2000 年初,澳大利亚安德森(Denis L.Anderson)对采集自亚洲各地东方蜜蜂(蜂螨原始寄主)和 各地西方蜜蜂的大量大蜂螨样本进行线粒体 DNA测序的综合研究,结果表明:原被归入雅氏瓦螨的东方蜜蜂寄生螨,应划分为 2 个种,一个是新界定的雅氏瓦螨,主要分布在印尼和马来西亚,已发现 9 个基因型;另一个是新定名的狄斯瓦螨,分布于亚洲大陆的东方蜜蜂和 各地的西方蜜蜂,已发现 11 个基因型。本产品以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测狄斯瓦螨的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据狄斯瓦螨高度保守区设计,不会跟其他病毒的 DNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分

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运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液, 用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品, 设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 50 次免 DNA 提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模 板 ,省 略了 DNA 提取 步 骤。
三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。

10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

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2022102710003526963

五、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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