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Variola Virus(VARV)天花病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
物品单位 价格 品牌
3990 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50次
  • 货号:LM815-11100
  • 发布日期: 2022-10-27
  • 更新日期: 2022-10-27
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM815-11100
用途范围 仅供科研
纯度 %
CAS编号
规格 50次
是否进口

Variola Virus(VARV)天花病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

天花病毒(Variola Virus,VARV) 会引起天花,是一种烈性传染病,感染天花病毒后的潜伏期平均约为12天,感染后的初期症 状包括:高烧、疲累、头疼、心跳加速及背 痛。2-3天后,会有典型的天花红疹明显地分布在脸部、手臂和腿部。在发疹的初期,还会有淡红色的块状面积伴随疹子而出现。病灶在几天之后开始化脓,直到第2个星期开始结 痂。接下来的3-4周慢慢发展成疥 癣,然后慢慢剥落。该病毒会对人体健康有较大影响,因此天花病毒的快速准确鉴定对该病的预 防 和 检 疫 有 着 重 要 作 用。
因此快速检测天花病毒具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测天花病毒的试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据天花病毒通用高度保守区设计。
5.本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

20221027095613953532022102709562202341

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。

使用方法

一、稀释PCR 阳性对照(以10E1-10E6 拷贝/μL 这6个10倍稀释度为例)
如果做定性实验,则此步可以跳过。如果做定量实验,则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品只提供 DNA 片段作为阳性对照。
1.  标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。
2.用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液( 用带芯枪头,下同)。
3.在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟, 得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
二、样品 DNA 的制备
7.如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是样品制备 PC(样品制备阳性对照),一个是样品制备 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。
8.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记 N+9个PCR 管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于 PCR 阳性对照(用第4号管中的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为描述操作步骤,
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设 置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加):

成分

样品管

N+2

PCR 阴性对照管

标准曲线

样品管(1-6

2×Probe qPCR MagicMix

10μL

10μL

各 10μL

天花病毒探针法qPCR 引物混合液-探针混合液

3μL

3μL

各 3μL

N+2 个待测 DNA模板

7μL

不加

不加

超纯水

不加

7μL

不加

第 6 步所得标准曲线样品稀释液(1-6 号)

不加

不加

各7μL(1 号样到1 号管,2 号样到2 号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

5min

qPCR 反应

(40 个循环)

95℃

15sec


60℃

1min(采集 FAM 通道的荧光信号)

四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 35。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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