Bacillus cereus蜡样芽胞杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus），又称仙人掌杆菌，是一种革兰氏阳性菌，β溶血性的杆状细菌。经常在土壤和食物中被发现，有些菌株会引起；另外一些菌株则对其他动物有益。蜡样芽孢杆菌是兼性厌氧性。与其他芽孢杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。它的致病因子包括施普善和磷脂酶 C。因此快速检测蜡样芽孢杆菌具有重要意义。
本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测蜡样芽孢杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据蜡样芽孢杆菌通用高度保守区设计。
5.本产品足够50次 20μL 体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。

规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。

使用方法

一、稀释PCR 阳性对照（以10E1-10E6拷贝/μL 这6个10倍稀释度为例）
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品只提供 DNA 片段作为阳性对照。
1.  标记6个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。
2.用带芯枪头分别加入45μL荧光 PCR专用模板稀释液（ 用带芯枪头，下同）。
3.在 6 号管中加入5μL1×10E7 拷贝/μL的阳性对照（试剂盒提供），充分震荡 1 分钟，得 1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在4号管中加入5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照（上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
二、样品 DNA 的制备
7.如果有 N 个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是样品制备 PC（样品制备阳性对照），一个是样品制备 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记 N+9个PCR 管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记 N+4个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于 PCR 阳性对照（用第4号管中的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为描述操作步骤，
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设 置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加）：

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：

四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于35。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于40则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于40，则为阳性。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。