RIPA裂解液(强,无抑制剂)

产品名称 RIPA裂解液(强,无抑制剂)

保质期 1年

保存条件 -20℃

简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由 Tris 、NP-40、 sodium deoxycholate 等组成，不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。
组成：

保存条件：
-20℃保存，一年有效。
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、取 Enhanced RIPA lysis buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，，低速离心，弃上清。
3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。
4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制
剂。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 裂解液的比例，
加 入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。
4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
3、按照每20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解。
4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、     去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、     如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、     如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。
4、     如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex 使样品裂解充分。
5、     溶解 Regal RIPA Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。
6、     裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。
7、     细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
8、本产品仅供科研使用，严禁它用。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。