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酰基转移酶(AAT)检测试剂盒(分光光度法)
物品单位 价格 品牌
2750 联迈生物
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50T/48S/盒
  • 货号:LM-FA8005
  • 发布日期: 2019-04-08
  • 更新日期: 2022-06-14
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 联迈生物
货号 LM-FA8005
用途范围 AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
纯度 99%
CAS编号
规格 50T/48S/盒
是否进口

酰基转移酶(alcohol acyl transferaseAAT)活性测定试剂盒说明书

                                                            分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

测定原理:

AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,释放的CoA还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412 nm吸光度增加速率可计算AAT活性。

组成:

产品名称

LM-FA8005-25T/24S

LM-FA8005-50T/48S

Storage

提取液:液体

25ml

50ml

4℃

试剂一:液体

25ml

50ml

4℃

试剂二:粉剂

1瓶

1瓶

-20℃

试剂三:粉剂

1支

1瓶

4℃避光

说明书

一份

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。

粗酶液提取:

1.     组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.     细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.     液体:直接检测。

FA005-25T/24S-AAT测定操作:

1、分光光度计预热30min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前在试剂二瓶中加入22.5mL试剂一,充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、试剂三的配制:临用前加无水乙醇1.25mL充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存。

4、空白管:在Ep管或96孔板中加入50μl提取液和900μL工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入50μL试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A空白管。

5、测定管:在Ep管或96孔板中加入50μl样本和900μL工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入50μL试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A测定管。△A=A测定管- A空白管,空白管只要做一管。

FA005-50T/48S-AAT测定操作:

1、分光光度计预热30min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前在试剂二瓶中加入45ml试剂一,充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、试剂三的配制:临用前加无水乙醇2.5ml充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存。

4、空白管:在Ep管或96孔板中加入50μl提取液和900μl工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入50μl试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A空白管。

5、测定管:在Ep管或96孔板中加入50μl样本和900μl工作液,充分混匀,35℃反应15min,加入50μl试剂三,充分混匀,25℃静置10min,测定412nm处吸光值,记为A测定管。△A=A测定管- A空白管,空白管只要做一管。

AAT活性计算公式:

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷(×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 98.04×△A÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(×d)×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T =98.04×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷(×d)×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T

=98.04×△A÷ 细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。

AAT (nmol/min /ml) = △A ÷(×d)×V反总÷V样÷T =98.04×△A

:TNB消光系数,13600L/mol/cm;V反总:反应总体积,1ml;V样:加入反应体系中上清液体积,0.05ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:蛋白含量,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,15 min。


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